尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG、UDG)来源于大肠杆菌重组克隆表达,分子量为25kDa,可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶。UNG酶对RNA无活性,主要应用于PCR扩增产物的防污染。
如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键,降解该PCR扩增产物。
活性定义:37℃条件下,1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。
保存:-20℃,避免反复冻融。
贮存溶液:20mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,0.05% Tween20,50%glycerol,pH8.0。
质量控制:1:SDS-PAGE电泳纯度大于98%;
2:降解活性、批间差异、稳定性;
3:1U UNG在37℃处理3分钟后,103拷贝以下含U模版应完全降解,不能产生扩增产物;:
4:无外源核酸酶活性,无外源内切、外切核酸酶污染。